Dna 전기영동 실험 고찰 - dna jeongiyeongdong silheom gochal

DNA Electrophoresis
DNA 전기영동은 크기, 전하 또는 구조가 다른 DNA 조각을 분리하는 기본적인 방법 입니다. DNA는 구조상 Backbone의 Phosphate group을 가지고 있어 전기영동에 사용되는 Buffer안에서 음전하를 띄고 있으며 두 전극 사이에 위치했을 때 (+)극으로 움직이는 기본적인 원리를 가지고 있습니다. 이때, Agarose나 Polyacrylamide와 같은 Gel Matrix 사이를 DNA 분자가 통과하는 속도는 분자량이 커질수록, Gel의 농도가 높을 수록 늦어지게 됩니다.
Tip! Agarose gel : 100bp – 20kb / Polyacrylamide gel : ≤ 1kb

1) Agarose gel 만들기(1.2% Agarose gel, 50ml)
① 50ml의 1X TAE 또는 1X TBE Buffer에 Agaorse Powder 0.6g을 넣습니다.
② 전자레인지에 넣어 끓여준 후 Agarose가 완전히 녺으면 꺼낸 후 살짝 식힙니다.
③ 완전히 식기전에 EtBr(1:10,000) 또는 Gel Staining solution(Protocol에 따라)을 넣습니다.
(실험실에 따라 Gel이 완성된 후 염색해주기도 합니다- Post staining 방법)
④ Gel Tray에 붓고 완전히 굳을때까지 기다립니다.

	Product	Cat No.	Size		국내 재고
	HiQ™Standard Agarose	A0222-050	500 g		바로 구매
	HiQ™ Low Melting Agarose	A0223-010	100 g
	Agarose, Sepro	A0224-050	500 g		바로 구매
	Sepro Agarose LE Tablet	A0250-025	25 Tabs
	Sepro Agarose LE Tablet	A0250-050	500 Tabs
	50X TAE Buffer	T8050-050	500 ml		바로 구매
	5X TBE Buffer	T8051-050	500 ml
	Ethidium Bromide, 10mg/ml  Stock Solution	E0205-001	10 ml
	Ethidium Bromide, 10mg/ml  Stock Solution	E0205-002	20 ml
	SafePinky DNA Gel Staining Solution	S1000-050	500 ml		바로 구매
	SafePinky DNA Gel Staining Solution(10,000X) In Water	S1001-050	2x250 μl

*SafePinky DNA Gel Staining Solution은 EtBr을 대체할 수 있는 인체에 무해한 DNA Gel Staining Solution 입니다.

2) DNA Sample Loading
⑤ 분리할 DNA Sample에 6X Loading Dye를 1X로 혼합하여 준비합니다.
     ⑥ 완전히 굳은 Gel에 DNA Ladder와 Loading Dye와 혼합된 Sample을 넣어 50~100V에서 전기영동 합니다.

	Product	Cat No.	Size		국내 재고
	iVDye 6X Gel Loading Dye	V1004-001	1 ml		바로 구매
	iVDye 50bp DNA Ladder	V1001-025	250 μl		바로 구매
	iVDye 100bp DNA Ladder	V1002-025	250 μl		바로 구매
	iVDye 1Kb DNA Ladder	V1003-025	250 μl		바로 구매
	100bp PCR Ranger DNA Marker, 100bp-To-3Kb	D1108-100	1 ml
	1Kb PCR Ranger DNA Marker, 750bp-To-20Kb	D1109-100	1 ml

3) 결과 확인
    ⑦ Gel Doc System 또는 UV visualizer를 이용하여 결과를 확인합니다.
           주의!  전기영동 후 DNA를 추출하여 실험해야 할 경우 너무 오랜시간 UV를 쬐이게되면 DNA에 변성이 발생할 수 있으므로 최대한 단시간 내 원하는 DNA를 추출하여 활용합니다

▶ 원하는 gene을 gel 상에서 잘라내 gel extraction 후 다음 실험에 활용 할 수 있습니다.

 * 제품문의   T.031-728-3237