사용 안하는건지.. luciferase assay 방법이 beta-galactosidaseassay보다 월등하기 때문에 선택을 하지 않는건지 궁금합니다. GFP 발현되는 vecter를 선택해서 보는 방법도 있겠지만.. GFP가 발현양의 actovoty가 ...
A. luciferase assay 방법이 빠르고 간편하기 때문입니다. beta-galactosidaseassay보다 비용이 좀 비싼 단점이 있지만, Promega에서 판매하는 Dual-luciferase assay kit의 manual을 보시면 도움이 되실 겁니다.
답변 1|2011.01.17
Q.beta-galactosidaseassay방법 알려주세요..
galactosidaseassay법으로 실험을 할려고 하는데요.. beta-galactosidase 가지고 있는 벡터를 세포에 transfaction시켜서 stainning할껀데요. 방법을 잘 몰라서요.. 세포를 70%에탄올로 고정시켜서 x-gal을 뿌려서 ...
A. 음 제 경우는 transfection후 셀을 2%나 4% formaldehyde로 잠깐 (기억에 5분정도) fixing한후, 1xPBS로 몇차례 닦아주고, x-gal solution을 세포가 덮힐정도만 넣고 37도 incubator에서 배양합니다. RT에서 배양해도 되고 ...
답변 1|2002.11.20
Q.betagalactosidaseassay
betagalactosidaseassay 진행시 Z-onpg 버퍼를 사용하는데... 질문이 있어 드립니다. z-onpg 버퍼를 만들고나서 냉장고에 보관을 하고 있는데 시간이 지나고 나면 버퍼에 결정이 생기는 것이 보입니다. 근데 그 ...
A. ONPG stock은 고농도 입니다 (사용자에 따라 다르지만 4mg/ml 수준). 낮은 온도에서 침전이 될 수도 있습니다. 조금씩 분주하여 얼려놓는 것이 좋으며 침전이 있으면 손으로 감싸 온도를 올려 녹여 사용하 ...
답변 1|2013.07.19
Q.betaGalactosidaseassay 관련 질문드립니다.
확인하는 과정으로 betaGalactosidaseassay를 하려고 합니다. protocol을 찾아보니 Negative control: cells lacking b-galactosidase, such as LT2; positive control: cells with high enzyme activity 이렇게 쓰여있는데 Negative control의 LT ...
A. 그 자료에서 사용한 것이 LT2 cell 이란 얘기지 꼭 그것을 사용할 이유는 없습니다. Transfection하기 이전의 cell은 gal gene을 가지고 있지 않을 것이므로 이를 control로 사용하시면 됩니다. 그리고 positive ...
답변 1|2008.06.08
Q.beta-galactosidaseassay할때
6well plate를 이용해서 beta gal assay할때 궁금한게 있는데요 샘플이 많은 경우에 시간에 따른 오차를 줄이기 위해서 어떤 방법을 이용하시나요? 샘플을 well에 넣을 때 시간간격을 고려해서 넣으시고 측정할 ...
답변 0|2006.10.25
Q.beta-gal assay에 대해서..
assay는 invitrogen에서 나온 beta-gal assay kit을 사용하구여 trasnfection시킨 ... 잘모르겠습니다. 또한, beta-galactosidase activity 계산하는게 식이 있던데 아시는 분은 좀 가르쳐주세요~~ * specific activity = nmoles of ONPG ...
A. 회사에 문의를 해보시는 것도 한방법이라 생각됩니다. ONPG assay에서는 위의 식에 대입해 얻은 specific activity로 최종값을 구하거나 또는 b-gal units = OD420 x 60min/incubation time x100의 간단한 상대적 수식으로 ...
답변 2|2006.11.22
Q.betagalactosidaseassay
http://www.piercenet.com/browse.cfm?fldID=06010494 # 75768 kit를 써보신 분들께 질문합니다. Stop buffer를 넣고 30℃에서 몇 분 incubation 하는게 좋은가요 ?
A. There is no need for prolonged incubation of stop buffer for beta-gal assay. They recommend 15 sec incubation in 96-well plate (see attached).
답변 1|2012.04.02
Q.transfection, luciferase assay
transfection을 확인하고, luciferase assay를 합니다. 그런데 beta-galactosidase의 색이 노랗게 변하지도 않고, Luciferase assay값이 정말..정말....저조합니다... 100을 안넘어요..................................................
아....
A. 같네요. 물론 tranfection 효율은 좀 낮아지겠지만;; beta-gal assay에서 노랗게 변하지 않는다는 것 자체가 transfection이 안된것을 의미 하기때문에 굳이 luciferase 까지 해서 시약낭비를 할거 까진 ㅠㅠ beta-gal ...
답변 4|2010.03.23
Q.프로모터 assay시...
리포터 진을 하나만 가지고 테스트 해도 괜찬을까요? 두개 이상의 리포터 진을 달아서 프로모터 assay 해야 ... 리포터로 쓰이는 것들 중....betagalactosidase만 하느냐 아님 luciferase 도 assay 하는지...
A. Reporter assay는 하나의 reporter만으로도 충분합니다. 하지만 transfection의 영향과 loading control을 위해 두개의 vector를 병행해 사용합니다. 분석하고자 하는 promoter의 reporter로 luciferase나 CAT을 사용했다면 ...
