DNA Electrophoresis
DNA 전기영동은 크기, 전하 또는 구조가 다른 DNA 조각을 분리하는 기본적인 방법 입니다. DNA는 구조상 Backbone의 Phosphate group을 가지고 있어 전기영동에 사용되는 Buffer안에서 음전하를 띄고 있으며 두 전극 사이에 위치했을 때 (+)극으로 움직이는 기본적인 원리를 가지고 있습니다. 이때, Agarose나 Polyacrylamide와 같은 Gel Matrix 사이를 DNA 분자가 통과하는 속도는 분자량이 커질수록, Gel의 농도가 높을 수록 늦어지게 됩니다.
Tip! Agarose gel : 100bp – 20kb / Polyacrylamide gel : ≤
1kb
1) Agarose gel 만들기(1.2% Agarose gel, 50ml)
① 50ml의 1X TAE 또는 1X TBE Buffer에 Agaorse Powder 0.6g을 넣습니다.
② 전자레인지에 넣어 끓여준 후 Agarose가 완전히 녺으면 꺼낸 후 살짝 식힙니다.
③ 완전히 식기전에 EtBr(1:10,000) 또는 Gel Staining solution(Protocol에 따라)을 넣습니다.
(실험실에 따라 Gel이 완성된 후 염색해주기도 합니다- Post staining 방법)
④ Gel Tray에 붓고 완전히 굳을때까지 기다립니다.
Product | Cat No. | Size | 국내 재고 | ||
HiQ™Standard Agarose | A0222-050 | 500 g | |||
HiQ™ Low Melting Agarose | A0223-010 | 100 g | |||
Agarose, Sepro | A0224-050 | 500 g | |||
Sepro Agarose LE Tablet | A0250-025 | 25 Tabs | |||
Sepro Agarose LE Tablet | A0250-050 | 500 Tabs | |||
50X TAE Buffer | T8050-050 | 500 ml | |||
5X TBE Buffer | T8051-050 | 500 ml | |||
Ethidium Bromide, 10mg/ml Stock Solution | E0205-001 | 10 ml | |||
Ethidium Bromide, 10mg/ml Stock Solution | E0205-002 | 20 ml | |||
SafePinky DNA Gel Staining Solution | S1000-050 | 500 ml | |||
SafePinky DNA Gel Staining Solution(10,000X) In Water | S1001-050 | 2x250 μl |
*SafePinky DNA Gel Staining Solution은 EtBr을 대체할 수 있는 인체에 무해한 DNA Gel Staining Solution 입니다.
2) DNA Sample Loading
⑤ 분리할 DNA Sample에 6X Loading Dye를 1X로 혼합하여 준비합니다.
⑥ 완전히 굳은 Gel에 DNA Ladder와 Loading Dye와 혼합된 Sample을 넣어 50~100V에서 전기영동 합니다.
Product | Cat No. | Size | 국내 재고 | ||
iVDye 6X Gel Loading Dye | V1004-001 | 1 ml | |||
iVDye 50bp DNA Ladder | V1001-025 | 250 μl | |||
iVDye 100bp DNA Ladder | V1002-025 | 250 μl | |||
iVDye 1Kb DNA Ladder | V1003-025 | 250 μl | |||
100bp PCR Ranger DNA Marker, 100bp-To-3Kb | D1108-100 | 1 ml | |||
1Kb PCR Ranger DNA Marker, 750bp-To-20Kb | D1109-100 | 1 ml |
3) 결과 확인
⑦ Gel Doc System 또는 UV visualizer를 이용하여 결과를 확인합니다.
주의! 전기영동 후 DNA를 추출하여 실험해야 할 경우 너무 오랜시간 UV를 쬐이게되면 DNA에 변성이 발생할 수 있으므로 최대한 단시간 내 원하는 DNA를 추출하여 활용합니다
▶ 원하는 gene을 gel 상에서 잘라내 gel extraction 후 다음 실험에 활용 할 수 있습니다.
* 제품문의 T.031-728-3237